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傷口愈合/細胞劃痕實驗新方法

          細胞劃痕實驗(Wound Healing)是一種操作簡單,經濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。這種方法的原理是,當細胞長到融合成單層狀態時,在融合的單層細胞上人為制造一個空白區域,稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區域使“劃痕”愈合。 基本的步驟包括“劃痕”的制造,細胞遷移期間圖像的獲得以及后期數據的處理。 

 

特點: 
 

1.  在一定程度上模擬了體內細胞遷移的過程。


2.  
非常適合研究細胞與胞外基質(ECM),細胞與細胞之間相互作用引起的細胞 遷移。


3.  
與包括活細胞成像在內的顯微鏡系統兼容,可用于分析細胞間的相互作用。


4.  
研究細胞遷移的體外實驗中簡單的方法。


傳統實驗方法 實驗步驟: 
 

1.  培養板接種細胞之前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標記(方便拍照時定位同一 個視野)。


2.  
細胞消化后接入12孔板,數量以貼壁后鋪滿板底為宜(數量少時可培養一段時間至鋪滿板底)。


3.  
細胞鋪滿板底后,用1 ml槍頭垂直于孔板制造細胞劃痕,盡量保證各個劃痕寬度一致。(人工槍頭制造劃痕難以保證劃痕寬度的一致性,影響實驗結果,這也是該方法大的缺陷。)


4.  
吸去細胞培養液,用PBS沖洗孔板三次,洗去劃痕產生的細胞碎片。

 


5.  
加入無血清培養基,拍照記錄。


6.  
將培養板放入培養箱培養,每隔4-6小時取出拍照。


7.  
根據收集圖片數據分析實驗結果。


Culture Insert
方法 
  81176 280×280.jpg

1.  準備細胞,培養液,culture Insert。


2.  
如圖,將細胞接種于Dish中間的Insert,細胞長滿Insert 區域后用鑷子移除Insert即可產生500 μm寬度的劃痕。


3.  
每隔4-6小時拍照記錄。


4.  
根據收集圖片數據分析實驗結果。 
 
 2.jpg

3.jpg
 

實驗原理示意圖

 

總結:相比較于傳統的劃痕實驗,Ibidi的設計更科學、重現性更好: 
 
 4.jpg
 

除了保證劃痕均一性的難題,相信各位同學覺得難的還有后期實驗結果的處理,這里給大家分享一個操作非常簡單的在線軟件,只需注冊就可以免費使用,只要上傳圖片很快就能把實驗結果發到注冊郵箱,非常方便。

Wound Healing Image Analysis - WimScratch
 5.jpg
 
 

Analysis Data Contains: 
 

Cell covered area

Speed of closure (available  5 images)

Acceleration characteristics (available  5 images)

Overview chart

Center piece approximation (available  10 images)

 

 

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